Dve leti sta minili, od kar je Peter Parker (Tobey Maguire) odkorakal od svoje dolgoletne ljubezni Mary Jane Watson (Kirsten Dunst) in se odločil podati po poti odgovornosti, ki jo je prevzel kot Spiderman. Peter se mora spopadati z novimi izzivi in se hkrati sprijazniti z "darom in prekletstvom" svojih moči, ko skuša najti srednjo pot med identitetama zmuzljivega superjunaka Spidermana in življenjem študenta. Ko mu pot prikriža mogočni zlikovec Doktor Octopus alias Doc Ock (Alfred Molina), to ogrozi ljudi, ki so Petru najbolj pri srcu. Petrovo dolgoletno hrepenenje po M.J. postane še močnejše, ko se bori z željo, da bi se odrekel skrivnemu življenju in ji izpovedal ljubezen. Medtem M.J. živi naprej. Odločila se je za igralsko kariero in v njeno življenje je vstopil nov moški. Petrov odnos z najboljšim prijateljem Harryjem Osbornom (James Franco) je zasenčila Harryjeva vse močnejša želja, da bi se maščeval Spidermanu, ki je po njegovem mnenju odgovoren za očetovo smrt. Petrovo življenje postane še bolj težavno, ko se mora soočiti z novim nasprotnikom, dr. Ottom Octaviusom (Molina). Peter se mora potruditi in sprejeti svojo usodo ter vpreči vse svoje talente superjunaka, da bi temu diaboličnemu blaznežu prekrižal osmerokrake poti.